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长沙市疾病预防控制中心:复合免疫亲和柱净化结合超高效液相色谱-串联质谱法测定预制菜中5种真菌毒素

2026-05-29 21:38:24

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本文立足食品质量安全检测实际，建立复合免疫亲和柱净化结合超高效液相色谱 - 串联质谱（UPLC-MS/MS） 检测方法，实现预制菜中 4 种黄曲霉毒素与玉米赤霉烯酮共 5 种真菌毒素的同步定性、定量分析。

该方法将特异性净化技术与高灵敏质谱检测技术有机结合，完美适配预制菜复杂基质，整套流程操作规范、稳定性强、通量高。

复合免疫亲和柱净化结合超高效液相色谱-串联质谱法测定预制菜中5种真菌毒素

汪琼¹,严付华¹,胡骢¹,左家信²

（1.长沙市疾病预防控制中心，长沙　410003；2.湖南省疾病预防控制中心，长沙　410001 ）

DOI：10.3969/j.issn.1008-6145.2026.02.004

摘要：建立了一种基于复合免疫亲和柱净化结合超高效液相色谱-串联质谱的方法，用于测定预制菜中黄曲霉毒素（AFTB₁、AFTB₂、AFTG₁、AFTG₂）及玉米赤霉烯酮（ZEN）的含量。样品经0.1%（体积分数）甲酸溶液-84%乙腈溶液提取，提取液经缓冲溶液稀释后，采用复合免疫亲和柱进行净化和富集，氮吹浓缩后以BEH C₁₈色谱柱分离，流动相为甲酸溶液和体积比为1∶1的甲醇-乙腈混合溶液，采用梯度洗脱程序，电喷雾离子源正负离子切换模式扫描，多反应监测（MRM）结合内标法定量分析。5种真菌毒素的质量浓度在各自范围（黄曲霉毒素0.5～50 μg/L，玉米赤霉烯酮5.0～500 μg/L）内与对应的色谱峰面积线性关系良好，相关系数均不小于0.999 0。3个加标浓度水平的回收率为80.1%～97.6%，测定结果的相对标准偏差为1.6%～4.8%（n=6）。该方法适用于预制菜中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的高灵敏度、高准确性检测。

关键词：玉米赤霉烯酮；黄曲霉毒素；预制菜；复合免疫亲和柱；超高效液相色谱-串联质谱法

黄曲霉毒素(AFTB₁、AFTB₂、AFTG₁、AFTG₂)和玉米赤霉烯酮(ZEN)是食品中常见的真菌毒素^[1]，主要由曲霉属和镰刀菌属产生^[2‒4]。这些毒素广泛污染玉米、花生、谷物、油脂种子等农产品^[5‒6]，对人类健康构成严重威胁，尤其AFTB₁、AFTB₂、AFTG₁、AFTG₂和ZEN具有强免疫抑制性、致畸性和致癌性^[7‒9]。随着食品市场快速发展和人们工作生活节奏加快，预制菜产业迅速扩张，其便捷性和标准化受到消费者欢迎。然而，预制菜原料来源多样、加工环节复杂，受真菌毒素污染的原料易进入生产链，加工过程中的水分活度变化和热处理可能无法完全降解热稳定性高的真菌毒素，甚至因浓缩效应导致残留水平升高，形成“隐蔽性”风险，因此，发展高效、精准的真菌毒素检测手段，是应对预制菜产业快速发展、保障公众饮食安全的必然要求。

真菌毒素的检测方法目前广泛应用的有高效液相色谱荧光法^[10‒11]、高效液相色谱-串联质谱法^[12‒14]等。常用的净化方法有QuEChERS萃取法^[15‒17]和免疫亲和柱法^[18‒20]。UPLC-MS/MS(超高效液相色谱-串联质谱)技术兼具高效分离能力与高灵敏度、高选择性及结构确证能力；免疫亲和柱则依托抗原-抗体特异性结合，实现复杂基质中目标物的高效净化与富集^[21]。预制菜基质常含高脂肪、高蛋白、高盐、调味料、色素及加工副产物，基质干扰显著，对提取、净化及定量提出更高要求。笔者基于复合免疫亲和柱净化与UPLC-MS/MS技术，建立了一种同时检测预制菜中5种真菌毒素的方法，为该类食品中真菌毒素的监测与安全质量控制提供了可靠的技术支持。

1实验部分

1.1仪器与试剂

超高效液相色谱-串联质谱仪：TQD型，美国沃特世公司。

涡旋混合器：NP-28S型，中国旭日有限公司。

超声提取仪：S120型，德国艾尔玛公司。

氮吹仪：MV5型，美国莱伯泰科公司。

高速离心机：3K15型，德国西格玛公司。

pH计：S220型，瑞士梅特勒-托利多仪器公司。

电子天平：ME204型，感量为0.000 1 g，瑞士梅特勒-托利多仪器公司。

固相萃取仪：LY-GXCQ-12型，中国路杨环保科技有限公司。

黄曲霉毒素B₁(AFTB₁)、黄曲霉毒素B₂(AFTB₂)、黄曲霉毒素G₁(AFTG₁)、黄曲霉毒素G₂(AFTG₂)标准溶液：各组分质量浓度均为1 μg/mL，批号为G25030153，坛墨质检科技股份有限公司。

玉米赤霉烯酮(ZEN)标准溶液：25 μg/mL，批号为2427358，上海安谱璀世标准技术服务有限公司。

黄曲霉毒素B₁-¹³C₁₇(AFTB₁-¹³C₁₇)、黄曲霉毒素B₂-¹³C₁₇(AFTB₂-¹³C₁₇)、黄曲霉毒素G₁-¹³C₁₇(AFTG₁-¹³C₁₇)、黄曲霉毒素G₂-¹³C₁₇(AFTG₂-¹³C₁₇)标准品：各组分质量浓度均为0.5 μg/mL，批号为E25060013，坛墨质检科技股份有限公司。

玉米赤霉烯酮-¹³C₁₈(ZEN-¹³C₁₈)标准品：50 μg/mL，批号为2D00G26，青岛普瑞邦生物工程有限公司。

乙腈、甲酸、甲醇：色谱纯，德国默克公司。

磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、氯化钾、氯化钠、盐酸、吐温-20：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。

黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮复合免疫亲和柱：3 mL，上海安谱璀世标准技术服务有限公司。

微孔滤膜：0.22 μm，有机系，天津津腾实验设备有限公司。

聚丙烯离心管：15 mL，美国康宁公司。

QuEChERS萃取试剂盒：1 g NaCl、0.5 g 柠檬酸二钠盐、4 g MgSO₄、1 g柠檬酸钠；美国安捷伦科技有限公司。

实验用水：经净化系统过滤超纯水。

预制菜样品：牛三鲜(牛肉、牛肚、牛肠、牛筋、食用植物油、豆瓣酱等配料)；羊肉煲(羊肉、食用植物油、香辛料、食用盐等配料)；酸菜巴沙鱼(巴沙鱼柳、老坛酸菜、植物油、辣椒酱、酸菜酱等配料)，市售。

1.2仪器分析条件

1.2.1色谱仪

色谱柱：BEH C₁₈柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm，美国沃特世公司)；柱温：40 ℃；进样体积：10 μL；流动相：A相为0.1%(体积分数，下同)甲酸溶液，B相为乙腈-甲醇混合溶液(体积比为1∶1，下同)；流量：0.2 mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序为0～0.5 min，B相保持35%，2～3 min，B相由35%提高至100%，3～5 min，B相保持100%，5～5.5 min，B相由100%降低至35%，5.5～9.5 min，B相保持35%。

1.2.2质谱仪

电喷雾离子源(ESI)：正负离子切换模式；离子源温度：600 ℃；碰撞气：氩气；气帘气压力：200 kPa；雾化气压力：500 kPa；喷雾电压：4 500 V；多反应监测(MRM)模式；具体参数见表1。

表1质谱参数Tab. 1Mass Spectrometry Parameters

注：*为定量离子。

1.3实验方法

1.3.1溶液配制

混合标准储备液：准确移取AFTB₁、AFTB₂、AFTG₁、AFTG₂标准溶液1.0 mL，ZEN标准溶液400 μL至2.0 mL容量瓶中，用乙腈定容至标线，配制成AFTB₁、AFTB₂、AFTG₁、AFTG₂质量浓度均为0.5 μg/mL，ZEN质量浓度为5 μg/mL的混合标准储备液。

混合同位素内标工作液：准确移取AFTB₁-¹³C₁₇、AFTB₂-¹³C₁₇、AFTG₁-¹³C₁₇、AFTG₂-¹³C₁₇标准品1.0 mL，ZEN-¹³C₁₈标准品200 μL，用乙腈定容至10 mL，配制成AFTB₁-¹³C₁₇、AFTB₂-¹³C₁₇、AFTG₁-¹³C₁₇、AFTG₂-¹³C₁₇质量浓度均为50 ng/mL，ZEN-¹³C₁₈质量浓度为1 μg/mL的混合同位素内标工作液。

系列混合标准工作溶液：准确移取混合标准储备液1、5、10、20、50、80、100 μL至7只容量瓶中，并分别加入20 μL混合同位素内标工作液，用初始流动相定容至1 mL，配制成AFTB₁、AFTB₂、AFTG₁、AFTG₂质量浓度均分别为0.5、2.5、5.0、10.0、25.0、40.0 μg/L，ZEN质量浓度为5.0、25.0、50.0、100.0、250.0、400.0 μg/L，AFTB₁-¹³C₁₇、AFTB₂-¹³C₁₇、AFTG₁-¹³C₁₇、AFTG₂-¹³C₁₇质量浓度均为1.0 ng/mL，ZEN-¹³C₁₈质量浓度为20 ng/mL的系列混合标准工作溶液。

1.3.2样品处理

将预制菜样品中肉、菜、酱料等用匀浆机充分粉碎并混合均匀，准确称取5 g置于50 mL离心管，加入20 mL含0.1%甲酸的84%(体积分数，下同)乙腈溶液，涡旋混匀，超声提取30 min，于5 ℃下以6 000 r/min离心5 min，取上清液待用。

准确量取4 mL上清液，加入20 μL混合同位素内标工作溶液，用1%吐温-20-磷酸缓冲盐溶液稀释至50 mL，混匀备用。

将复合免疫亲和柱放置至室温，全部上清稀释液以2 mL/min过柱。依次用10 mL 0.5%吐温-20-磷酸缓冲盐溶液、10 mL磷酸缓冲溶液淋洗亲和柱，加压排出柱中残留液体。用3 mL甲醇洗脱液，收集洗脱液，于35 ℃水浴中氮吹至近干，用1 mL初始流动相复溶，经0.22 μm滤膜过滤后进样分析。

1.3.3定量分析

按1.2仪器工作条件，以相对离子丰度比和保留时间进行定性。以AFTB₁、AFTB₂、AFTG₁、AFTG₂、ZEN色谱峰面积与各对应内标色谱峰面积比值为纵坐标，以质量浓度为横坐标，建立线性回归方程，并对样品中各目标化合物进行内标法定量分析。

2结果与讨论

表25种真菌毒素的线性方程、相关系数、检出限和定量限Tab. 2Linear equations，correlation coefficient，detection limits，and quantification limits of 5 mycotoxins

2.6阴性样品加标回收率和精密度

称取空白样品5 g，分别准确加入标准溶液适量，使添加水平分别为低、中、高3个水平，每个水平平行制备6份样品溶液检测，计算各组分回收率和测定结果的相对标准偏差(RSD)，结果见表3。由表3可知，5种组分的平均回收率为80.1%～97.6%，RSD为1.6%～4.8%，说明该方法准确度和精密度良好。

表3阴性样品加标回收率和精密度Tab. 3Recoveries and precision of negative samples

3结论

建立了一种基于复合免疫亲和柱净化结合超高效液相色谱-串联质谱的分析方法，用于同时测定预制菜中5种真菌毒素。通过系统优化仪器分析条件、提取液组成及净化参数，实现了多种真菌毒素的高效、准确测定。该方法操作简便、净化效果良好、稳定性高，适用于预制菜中真菌毒素的高通量检测，可为预制菜质量安全监管提供可靠技术支持。鉴于市场上预制菜种类繁多，原料和加工工艺差异显著，后续研究将进一步拓展至其他真菌毒素及化学污染物检测方法开发与验证，以保障预制菜的食用安全。

引用本文：汪琼，严付华，胡骢，等 . 复合免疫亲和柱净化结合超高效液相色谱-串联质谱法测定预制菜中5种真菌毒素［J］. 化学分析计量，2026，35（2）： 26.(WANG Qiong, YAN Fuhua, HU Cong, et al. Determination of five mycotoxins in prefabricated dishes by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry combined immunoaffinity column cleanup[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2026, 35(2): 26.)

通讯作者：左家信，硕士，主管技师，主要从事食品理化检验工作

基金信息：湖南省自然科学基金项目（2025JJ80517）

中图分类号：O657

文章编号：1008-6145(2026)02-0026-06

文献标识码：A

收稿日期：2025-10-09

出版日期：2026-02-20

网刊发布日期：2026-03-10

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